江南秋

研究不同一氧化氮合酶（NOS）抑制剂对大鼠肝组织酒精性脂肪变及氧化抗氧化系统的影响，探讨不同来源一氧化氮(NO)在肝酒精性脂肪变中的作用。
    一、材料与方法
    1．材料：(1)实验试剂：丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、NO试剂盒购自南京建成生物工程研究所；N6-(1-亚氨乙基)赖氨酸（L-NIL）及Nω-亚硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）为美国Sigma公司产品。(2)实验动物48只体重180～220g雄性SD大鼠由华中科技大学同济医学院动物中心提供。
    2．方法：(1)动物模型及分组：将大鼠随机分成5组，正常对照组8只，其余组均为10只。造模方法为：先给大鼠随意饮用2%蔗糖溶液3d，然后再加入5%（V/V）的乙醇，每隔4d增加5%直至15%，然后再每周增加5%直至终浓度为40%，从饮用40%乙醇开始计算造模时间，大鼠进食普通饲料(脂肪占5%)。造模时间分别为A组16周，B组20周，C组20周，D组20周。C、D组另从第17周开始分别腹腔注射L-NAME 70mg·kg-1·d-1、L-NIL 3mg·kg-1·d-1。E组为正常对照组，饮用2%蔗糖溶液，时间为20周。B、E组从第17周开始每日腹腔注射等量的生理盐水。(2)肝组织中NO、MDA、GSH、SOD含量测定：大鼠颈椎脱臼处死后，取肝右叶1g湿重组织，4℃下加等渗盐水制成10%的匀浆，硝酸还原酶法测NO代谢产物NO2-和NO3-间接反映NO水平，硫代巴比妥酸法检测MDA含量，二硫代二硝基苯甲酸法测定GSH含量，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力，双缩脲法测定肝组织中蛋白含量。(3)肝组织病理学检查：取肝左叶，10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察肝组织病理变化。肝细胞脂肪变性的半定量指标按脂变肝细胞占肝细胞的百分比分为5个等级，即：脂变肝细胞<5%为-；脂变肝细胞在5%～25%为+；脂变肝细胞在26%～50%为++；脂变肝细胞在51%～70%为+++；脂变肝细胞>70%为++++。
    3. 统计学处理：计量资料用方差分析和组间q检验，等级资料用秩和检验。
    二、结果
    1. 一般状况：实验过程中A、B、C、D组在第16周前分别有2、3、4、4只大鼠死亡；E组大鼠全部存活。饮酒大鼠与E组大鼠相比毛发光泽差，食欲下降，体重减轻，嗜睡或易激惹。
    2. 各组大鼠肝组织病理学的变化：E组大鼠肝脏形态学正常。A组大鼠肉眼见肝脏明显肿大，边缘变钝，呈黄色缺血状，切面有油腻感，光镜下见肝细胞出现了+～++级脂肪变性，主要见于肝腺泡Ⅱ、Ⅲ区，为胞浆内以大泡型为主的混合脂滴，空泡将肝细胞核挤向一侧。B组大鼠肝细胞脂肪变性较A组更明显，伴有轻度炎性细胞浸润。与B组大鼠相比，C组大鼠肝脂肪变性明显加重，伴明显炎性细胞浸润，点状或灶状坏死；而D组大鼠与B组相比肝脂肪变性明显减轻,见表1。
    3. 各组大鼠肝组织中NO水平和氧化抗氧化系统的改变：与E组相比，A、B组肝组织中NO、MDA水平明显增高，B组增高更明显；GSH、SOD水平明显降低，B组降低更明显。与B组相比，C组肝组织中NO、SOD、GSH水平明显降低，而MDA水平明显升高；D组肝组织中NO、MDA水平明显降低，而SOD、GSH水平明显升高，见表2。
    三、讨论
    实验结果显示，酒精引起肝脂肪变性时，肝组织中脂质过氧化产物MDA含量明显增高，而抗氧化物质GSH、SOD含量明显降低，且随着饮酒时间的延长及肝脂肪变性程度的加重而加剧，提示氧应激和脂质过氧化促使了酒精性肝脂肪变性的发生与发展。经诱导型NOS（iNOS）选择性抑制剂L-NIL干预后，肝组织中NO水平明显降低、氧应激及脂肪变性显著减轻，表明iNOS来源的NO减少可减轻氧自由基对肝脏的损伤。L-NAME虽也使肝组织中NO水平明显降低，但增强了氧应激及加重了脂肪变性。L-NAME对结构型NOS（cNOS）的抑制作用明显高于其对iNOS的作用，肝组织中NO水平降低主要由于cNOS所产生的NO减少，提示cNOS来源的NO可能起抗氧自由基损伤的保护作用。