江南秋

戴锴 齐俊英( h  B) t8 n/ @. [
中华肝脏病杂志 ! Z6 |2 n, I1 d8 Q9 ^& F: h
[摘要]
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Effect of leptin on the development of hepatic fibrosis, a preliminary study. DAI Kai, QI Jun-ying.. x: ~* w* o6 t& `+ \! Y/ c
【Key words】    Liver fibrosis;  Leptin;  Procollagen I
1 Z- }' @5 j5 L' Y: Y4 X; V8 [5 c【First author''s address】    Department of Infectious Diseases, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China
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6 P8 U- w6 F0 E. m" ?. h　　近年研究发现，活化的肝星状细胞（HSC）的瘦素mRNA和蛋白质的合成增加[1]，慢性肝病患者血清中瘦素水平亦升高[2]。表明瘦素和肝纤维化的发生发展可能存在着一定的联系，现探讨瘦素对小鼠肝纤维化发展的影响和可能存在的机制。7 H& |! x: ^8 Q5 c: c' ?
　　一、材料与方法
. S5 K8 [; Q3 t7 {9 {+ p5 Q　　1．材料：（1）实验动物：6周龄雄性C57Bl/6小鼠24只，体重22g左右，由本院器官移植研究所提供。（2）试剂与实验仪器：重组小鼠瘦素购于美国R&D公司；双缩脲法蛋白定量试剂盒, 过氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）测定试剂盒购于南京建成生物工程公司；提取RNA的RNAex Reagent购于上海华舜生物工程有限公司；9600型DNA扩增仪，美国PE公司生产。
" @4 l* c( P8 T% t9 X' O　　2．方法：（1）小鼠分组及处理：随机分为4组，每次分别腹腔注射等渗盐水2ml/kg，瘦素1mg/kg,硫代乙酰胺（TAA）200mg/kg，瘦素1mg/kg加TAA 200mg/kg,每周3次。后两组为肝纤维化模型组，4周后处死。（2）肝组织匀浆SOD、MDA含量的测定按试剂盒的说明书进行，分别用U/mg、nmol/mg表示。（3）肝组织学观察：石蜡切片经脱蜡至水后，进行苦味酸天狼猩红特殊染色，普通光镜下观察胶原沉积情况和组织学变化。（4）肝组织α1(Ⅰ)型前胶原mRNA表达的检测：组织总RNA的提取按RNAex Reagent说明书进行。α1(Ⅰ)型前胶原的上游引物为5′-CCTGGACGCC ATCAAGGTCTAC-3′，下游引物为5′-CCAAGTTC CGGTGTGACTCG-3′，扩增片段为419bp。内参照为β-肌动蛋白，上游引物为5′-ACCACAGCTGAGAGGGAAA TCG-3′,下游引物为5′-AGAGGTCTTTACGGATGT CAACG-3′，扩增片段为277bp。反应先将1μg的总RNA逆转录为cDNA，再以cDNA为模板扩增：95℃预变性5min后，35个循环：95℃变性45s，56℃退火45s, 72℃延伸1min，终末延伸1循环：72℃ 7min。取反应产物10μl在20g/L琼脂糖凝胶上电泳30min（80V），图像分析仪采集图像，以内参β-肌动蛋白为标准作半定量分析。……# T$ t( n) d" O5 ]

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/ y6 o+ n  K8 a9 L2 H+ z4 A作者单位：430030 武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科