江南秋

杨春艳 苏先狮 李曼妮 何艳
中华肝脏病杂志
[摘要]

Immune responses to pcDNA3.1 hisB-IL-15 and HBsAg DNA vaccine in BALB/c mice. YANG Chun-yan, SU Xian-shi, LI Man-ni, HE Yan.
【Key words】    Interleukin-15;  DNA vaccine;  Mice
【First author''s address】    The Liver Disease Research Center of the First Affiliated Hospital, Nanhua University, Hengyang 421001, China

　　白细胞介素-15（IL-15）属螺旋结构细胞因子家族，它能促进T细胞、自然杀伤（NK）细胞和B细胞增殖及分化；具有诱导淋巴细胞产生γ干扰素（IFN-γ）及肿瘤坏死因子α的作用。IL-15与疫苗共同免疫时可刺激抗体产物增加，细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性加强。将IL-15表达质粒与HBsAg DNA疫苗共同免疫小鼠，以观察其对小鼠免疫应答的影响。
　　一、材料与方法
　　1. 材料：pcDNA3.1hisB-IL-15含人IL-15cDNA序列，由南华大学附属第一医院肝病研究中心构建；pcDNA3.1（+）-S含表达HBsAg的S基因，pcDNA3.1（+）为真核表达质粒，由罗红雨博士赠送。Yac-1细胞来自湘雅医学院免疫学教研室，SP2/0细胞来自肿瘤细胞研究所。5～8周龄Babl/c小鼠购自湘雅二院实验动物中心。Qiagen plasmid Mega Kits为德国Qiagen公司产品；LDH底物试剂为石川、张轼兴博士赠送；小鼠IL-4及IFN-γ的酶联免疫检测（ELISA）试剂盒为晶美生物技术有限公司产品；抗-HBs的检测为科华公司ELISA试剂盒。
　　2. 实验方法：(1)质粒DNA的制备：按Qiagen plasmid Mega Kits说明书操作。质粒DNA用等渗盐水调节浓度至1μg/μl， -20℃保存备用。（2）动物分组及免疫方法：选用体重相近的5～8周龄Babl/c小鼠15只，随机分为3组，每组5只；各组注射情况，对照组：pcDNA3.1（+）200μg/次；pcDNA3.1（+）-S 组：pcDNA3.1（+）-S 100μg/次加pcDNA3.1（+）100μg/次；联合免疫组：pcDNA3.1（+）-S 100μg/次加pcDNA3.1hisB-IL-15 100μg/次。用1ml的OT注射器行小鼠后肢多点肌肉注射，2、4周后分别同法加强1次。第6周拉颈处死小鼠去眼球采血，分离血清-20℃保存，同时制备小鼠脾淋巴细胞，用于免疫功能的检测。（3）体液免疫功能测定：免疫小鼠血清抗-HBs的测定参照科华公司ELISA试剂盒说明书进行，终止反应后用酶标仪测A450值。（4）NK细胞活性测定（LDH法）：取经24h培养的Yac-1细胞作为靶细胞，上述免疫小鼠脾淋巴细胞为效应细胞。效/靶细胞比例为10:1。（5）CTL杀伤实验（LDH法）：用pcDNA3.1（+）-S转染的SP2/0细胞作为靶细胞，效/靶细胞比例分别为50:1、25:1、12.5:1。（6）IL-4及IFN-γ的检测：根据ELISA试剂盒说明书进行操作。（7）统计学方法：检测数据用x-±s表示，比较两者之间的差异用SPSS10.0统计软件包行t检验。


基金项目：湖南省教委科研课题（02C404）
作者单位：421001 衡阳，南华大学附属第一医院肝病研究中心（杨春艳）；中南大学湘雅二院肝病研究中心（苏先狮、何艳）；广东省边防总队深圳医院传染科（李曼妮）