丙型肝炎病毒5′
目的 构建丙型肝炎病毒5′端非编码区（HCV 5′NCR）和NS3丝氨酸蛋白酶共调控外分泌性碱性磷酸酶（SEAP）表达细胞模型，并分析其用于抗HCV药物筛选和评价的可行性。 方法 用聚合酶链反应技术扩增HCV 5′NCR和NS3/4A片段，定向克隆至表达质粒pSEAP2-Control的SEAP基因上游，构建含HCV 5′NCR-NS3/4A-SEAP嵌合基因的重组表达质粒pNCR-NS3/4A-SEAP。将重组质粒转染至肝细胞株QSG7701，用化学发光法检测SEAP的表达，并观察HCV 5′NCR区对应的反义寡聚核苷酸（ASODN）和丝氨酸蛋白酶抑制剂TPCK对SEAP表达的影响。 结果 重组质粒pNCR-NS3/4A-SEAP有高强度SEAP表达，5μmol/L、10μmol/L ASODN和100μmol/L TPCK对SEAP表达有显著抑制作用（t值分别为4.315、6.985、6.949，P值均<0.01）。 结论 重组质粒pNCR-NS3/4A-SEAP的SEAP表达受HCV 5′NCR和NS3蛋白酶共调控，建立的细胞模型可用于以HCV 5′NCR和NS3蛋白酶为靶位点的药物筛选和评价。页:
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