肠源性内毒素血症在非酒精性脂肪性肝炎发病中的作用
肠源性内毒素血症（IETM）在酒精性肝炎的发病机制中起重要作用。非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是一种与酒精性肝炎相类似的病理学状态。利用高脂饮食建立NASH动物模型，以期研究内毒素在NASH发病中的作用。1．材料与方法：（1）动物模型的制作：雄性Wistar大鼠16只，体重140～160g，购自山西医科大学实验动物中心。正常喂养1周后，随机分为两组：正常组8只，普通饲料喂养。高脂饮食组8只，高脂饮食（88%普通饲料+10%猪油+2%胆固醇）喂养。实验动物自由饮水、进食，连续12周。（2）测定方法：血浆内毒素测定采用鲎试剂法，取血时要求严格无菌无热源；血清游离脂肪酸（FFA）的测定采用铜离子结合氯仿提取法；血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量测定采用放射免疫法；血清丙二醛（MDA）含量测定采用硫代巴比妥（TBA）比色法。同时取肝组织石蜡切片，HE染色观察肝脏病理学改变。（3）统计学处理：用SPSS10.0软件，计量资料用方差分析、t检验或相关分析，计数资料用秩和检验。
2. 结果：(1)正常组和高脂饮食组大鼠的体重分别是（206.50±5.09）g、（423.38±20.43）g；两组动物肝指数分别是2.790±0.089、4.326±0.210。至实验结束前，两组动物均无死亡发生。与正常组相比，高脂饮食组的体重及每100g体重的肝重（肝指数）均显著升高，t值分别是3.706、2.120，P值均<0.01。(2)两组动物血浆内毒素、血清FFA、TNF-α及MDA的变化见表1。高脂饮食组与正常组相比，血浆内毒素、血清FFA、TNF-α及MDA均明显升高，且血浆内毒素与血清FFA、TNF-α及MDA含量分别呈正相关（r值分别为0.750、0.623、0.587，P值均<0.01）。(3)肝脏组织学观察结果见表2。正常组大鼠肝组织形态学结构正常。高脂饮食组大鼠肝组织呈弥漫性、大泡性肝细胞脂肪变性，其中轻、中、重度脂肪变性分别为2、4、1例，100％存在小叶内以单个核细胞为主的炎症细胞浸润，6例出现汇管区炎症，有3例出现碎屑样坏死。以0.10Eu/ml为界将大鼠内毒素水平分为高、低两个组别，两组的病理分级经秩和检验，差异有显著性（T1=141，T2=112，P值均<0.05）。
表1 两组动物血浆内毒素、血清游离脂肪酸、肿瘤坏死因子-α及丙二醛的变化（x-± s）
组别 例数 内毒素（Eu/ml） 血清游离脂肪酸(Eq/L) 肿瘤坏死因子-α(ng/ml) 丙二醛（nmol/ml）
正常组 8 0.064±0.013 0.651±0.156 0.607±0.155 5.064±0.552
高脂饮食组 8 0.124±0.019 1.129±0.386 1.086±0.269 6.637±1.127
t值 2.589 3.153 3.614 2.904
P值 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05
表2 实验大鼠内毒素水平和病理分级的关系（只）
组别 脂肪肝病理分级
正常 轻度 中度 重度
内毒素高水平组 0 2 4 1
内毒素低水平组 6 3 0 0
内毒素低水平：0.05～0.10Eu/ml, 高水平：＞0.10Eu/ml
3．讨论：研究表明，NASH与酒精性脂肪性肝炎可能存在着共同的发病机制，酒精性肝病时有程度不等的IETM，结果提示高脂饮食组和正常组血浆内毒素水平相比差异有显著性，说明内毒素血症是重要的致病因子，在NASH中发挥重要作用。同时在内毒素高、低水平的两组中，病理改变的程度也明显不同，内毒素高水平组的病理改变较重，说明内毒素在肝细胞损伤中起重要作用。与正常组相比，高脂饮食组血清TNF-α显著升高，血浆内毒素和血清TNF-α的水平呈显著正相关，表明在NASH形成中内毒素对TNF-α有始动作用，内毒素在TNF-α介导的肝脏脂肪变的病理改变中起重要作用。高脂饮食组血清及肝组织匀浆MDA与正常组相比明显升高，提示内毒素引起的脂质过氧化导致的肝损伤同样是NASH的重要发病机制之一。在NASH的形成过程中，内毒素血症及其激活库普弗细胞释放的细胞因子和大量过氧化物的形成起着重要作用，可能在单纯性脂肪肝向脂肪性肝炎转化中起着关键性作用。通过各种治疗措施适当降低IETM及抑制库普弗细胞的功能可能有助于预防脂肪性肝炎的发生和发展。
（收稿日期：2003-08-06）
（本文编辑：何亚玲）
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