丁酸钠诱导体外培养的大鼠肝卵圆细胞分化为成熟肝细胞
王萍 贾继东 唐淑珍 阎钟钰 尤红 丛敏 王宝恩 陈丽 安威中华肝脏病杂志
[摘要]
目的 探讨分化刺激剂丁酸钠对体外培养的大鼠肝卵圆细胞分化的影响。 方法 从喂养含0.1%乙硫氨酸的胆碱缺乏性饮食4～6周的大鼠肝脏中分离出肝卵圆细胞，用免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法对其进行鉴定。用0.75mmol/L丁酸钠处理大鼠肝卵圆细胞后，姬姆萨染色观察细胞表型改变，western blot检测细胞白蛋白的表达水平。 结果 免疫细胞化学结果显示分离出的细胞既表达成熟肝细胞的标志物白蛋白，也表达胆管细胞的标志物细胞角蛋白19，RT-PCR结果显示这些细胞还表达干细胞的标志物c-kit，但不表达造血干细胞的标志物CD34，表明这些细胞是大鼠肝前体细胞—肝卵圆细胞。0.75mmol/L丁酸钠能诱导大鼠肝卵圆细胞出现明显的表型改变，细胞变大、变圆，核浆比减小，且双核细胞数增多，约占总细胞数的50%左右，同时western blot的结果显示0.75mmol/L丁酸钠能够提高大鼠肝卵圆细胞白蛋白的表达水平。 结论 分化刺激剂丁酸钠能诱导体外培养的大鼠肝卵圆细胞向成熟肝细胞分化。
基金项目：北京市优秀人才培养专项经费；“肝脏保护与再生调节北京市重点实验室”开放课题基金
作者单位：100050 北京友谊医院肝病中心（王萍、贾继东、唐淑珍、阎钟钰、尤红、丛敏、王宝恩）；北京，首都医科大学细胞生物系（陈丽、安威）
王萍 女，28岁，硕士，发表论文5篇。
通讯作者：贾继东
体外定向诱导E14小鼠胚胎干细胞为肝细胞
孟瑛 黄绍良 闵军 郭中敏 吴燕峰 包蓉中华肝脏病杂志
[摘要]
目的 探索体外定向诱导胚胎干细胞分化为肝细胞。 方法 常规方法培养E14小鼠胚胎干细胞（ESC）后，进行悬滴-悬浮培养，形成胚胎体，再进行分阶段定向诱导，在培养第9～12天、第12～18天以及第15～18天分别加入酸性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子和制瘤素M。利用倒置相差显微镜观察细胞形态变化，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法分析特异性基因mRNA的表达，并用吲哚氰绿（ICG）摄取和过碘酸雪夫反应（PAS）分析细胞的分化及功能。 结果 在诱导培养的第13天，细胞出现肝细胞样改变。RT-PCR分析可见，在诱导的第6天和第12天分别可以检测到内胚层或卵黄囊分化标志基因—甲状腺素运载蛋白和α1抗胰蛋白酶的mRNA表达，第6天出现未成熟肝细胞标志基因—甲胎蛋白 mRNA表达，第9天、第15天和第18天分别开始出现成熟肝细胞的特异性标志基因—白蛋白、葡萄糖6磷酸酶、酪氨酸氨基转移酶mRNA表达。同时，ESC源性肝细胞表现为ICG摄取和PAS反应阳性，经过诱导，ICG阳性细胞数约占85.1%。 结论 ESC源性肝细胞具备肝细胞特性，ESC有可能成为肝细胞治疗的替代供体细胞。
基金项目：国家自然科学基金（30371503）
作者单位：510120 广州中山大学附属第二医院干细胞研究中心（孟瑛、黄绍良、闵军、吴燕峰、包蓉）；广州中山大学中山医学院实验动物中心（郭中敏）
孟瑛 女，37岁，博士，副研究员，发表论文10余篇。
通讯作者：黄绍良
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