肝再生大鼠血清诱导骨髓干细胞向肝细胞分化的实验研究
周播江 钟翠平 顾云娣 张新华 梁春敏 吴超群中华肝脏病杂志
[摘要]
目的 观察肝大部切除大鼠再生血清和肝细胞生长因子（HGF）诱导骨髓干细胞向肝实质细胞分化的作用；探讨骨髓干细胞向肝细胞分化和增殖的体外培养条件和方法，为患者应用自身骨髓细胞修复损伤肝脏提供实验依据。 方法 制作肝大部切除大鼠肝再生动物模型，收集术后24h血清；分别应用鼠肝再生血清和HGF对大鼠骨髓细胞进行定向诱导分化培养；以免疫组化、RT-PCR和western blot等方法对分化不同阶段细胞进行检测。将分化细胞经尾静脉输入同系大鼠，观察输注细胞在肝、脾内的生长情况。 结果 活体移植分化细胞能定向迁移至肝和脾；体外及体内分化细胞在mRNA水平和蛋白质水平均表达白蛋白，并在一定时期内表达甲胎蛋白。 结论 大鼠骨髓干细胞在肝大部切除再生血清或HGF的诱导下能横向分化为肝实质样细胞。
基金项目：国家自科学基金（30370748）；国家教委博士点基金（20010246056）
作者单位：200032 上海，复旦大学上海医学院人体解剖学与组织胚胎学系（周播江、钟翠平、顾云娣、张新华、梁春敏）；复旦大学遗传研究所（吴超群）
周播江 男，40岁，博士，副教授。
通讯作者：钟翠平
含淤胆血清的培养体系体外诱导胚胎干细胞表达肝细胞功能的研究
方天翎 闵军 邓小耿 钱世昆鸟 褚忠华 陈亚进 邵静 魏菁 陈积圣中华肝脏病杂志
[摘要]
目的 探讨病理微环境体外诱导对小鼠胚胎干细胞（ESC）表达肝细胞功能的作用。 方法 悬滴培养ESC发育5～7d的拟胚体，将其离散细胞种植于不同的分化体系，观察ESC在自主分化、肝细胞生长因子（HGF）或5%淤胆血清+HGF诱导下每天的分化情况（倒置相差显微镜），以及细胞的糖原、甘油三酯、白蛋白及尿素氮合成功能，细胞吲哚氰绿（ICG）和荧光二乙酯（FDA）染色的情况。 结果 ESC自主分化难以控制，分化为3个胚层的细胞。HGF促进ESC向内脏内胚层和中胚层（心肌）分化，但两者仅能表达低水平的肝细胞特异性功能。引入淤胆血清的HGF诱导体系中ESC能分化为较为均一的多角形细胞，具有较高水平的糖原、甘油三酯、白蛋白和尿素氮合成能力，ICG和FDA染色阳性。 结论 自主分化和HGF诱导ESC表达肝细胞代谢的能力有限。体外模拟病理性微环境可诱导ESC定向分化为肝系细胞，并具有较高水平的肝细胞代谢功能。
基金项目：国家自然科学基金（30271277）；广东省自然科学基金重点项目（021851）
作者单位：510120 广州，中山大学附属第二医院肝胆外科（方天翎、闵军、邓小耿、钱世昆鸟、褚忠华、陈亚进、陈积圣），医学实验中心（邵静、魏菁）
方天翎 男，29岁，博士。
通讯作者：闵军
小鼠骨髓干细胞诱导分化为肝细胞的实验研究
周一鸣 胡大荣 姚鹏 范公忍中华肝脏病杂志
[摘要]
目的 探讨成年小鼠骨髓干细胞在肝细胞生长因子（HGF）作用下分化为肝细胞的可能性及其分化特性，为肝细胞移植提供实验基础。 方法 HGF 100ng/ml体外诱导小鼠骨髓干细胞向肝细胞分化，于诱导的第0、7、14、21、28天，观察细胞形态特征；半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测细胞白蛋白（ALB）、甲胎蛋白（AFP）mRNA水平的表达；免疫细胞化学法检测ALB、AFP和细胞角蛋白19（CK19）蛋白水平的表达。 结果 新鲜分离的骨髓干细胞ALB及AFP mRNA呈弱阳性。在非诱导组，培养7d时ALB mRNA已检测不到，AFP mRNA明显减弱，14d时消失。在诱导组，7d时ALB mRNA检测不到，14d时再次出现阳性条带，21d时表达量最大，而AFP mRNA在诱导组始终呈阳性，14d时表达量最大，以后逐渐减少。免疫细胞化学结果与RT-PCR结果基本一致，但CK19蛋白始终阴性。 结论 小鼠骨髓干细胞在HGF单独作用下能诱导分化为肝细胞样细胞，诱导分化的最佳时期是2～3周。
作者单位：100700 北京军区总医院肝病研究所
周一鸣 女，36岁，主治医师，在读博士，发表论文8篇。
通讯作者：胡大荣
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