瘦素对小鼠肝纤维化影响的初步研究
戴锴 齐俊英Q7?'`8T4j}4oQ中华肝脏病杂志 TB9V+kv-v z[;L
[摘要]0V5c d"|kL]
/n,E!N.Gu'w ob
Effect of leptin on the development of hepatic fibrosis, a preliminary study. DAI Kai, QI Jun-ying.5`#x:t0B n x
【Key words】 Liver fibrosis; Leptin; Procollagen I
【First author''s address】 Department of Infectious Diseases, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China0Qi brB5K f ?:QB
{&@ ?0g(d7HG2sV
近年研究发现，活化的肝星状细胞（HSC）的瘦素mRNA和蛋白质的合成增加[1]，慢性肝病患者血清中瘦素水平亦升高[2]。表明瘦素和肝纤维化的发生发展可能存在着一定的联系，现探讨瘦素对小鼠肝纤维化发展的影响和可能存在的机制。c{8M!Z^
一、材料与方法
1．材料：（1）实验动物：6周龄雄性C57Bl/6小鼠24只，体重22g左右，由本院器官移植研究所提供。（2）试剂与实验仪器：重组小鼠瘦素购于美国R&D公司；双缩脲法蛋白定量试剂盒, 过氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）测定试剂盒购于南京建成生物工程公司；提取RNA的RNAex Reagent购于上海华舜生物工程有限公司；9600型DNA扩增仪，美国PE公司生产。)w:_8NO.L b%qK
2．方法：（1）小鼠分组及处理：随机分为4组，每次分别腹腔注射等渗盐水2ml/kg，瘦素1mg/kg,硫代乙酰胺（TAA）200mg/kg，瘦素1mg/kg加TAA 200mg/kg,每周3次。后两组为肝纤维化模型组，4周后处死。（2）肝组织匀浆SOD、MDA含量的测定按试剂盒的说明书进行，分别用U/mg、nmol/mg表示。（3）肝组织学观察：石蜡切片经脱蜡至水后，进行苦味酸天狼猩红特殊染色，普通光镜下观察胶原沉积情况和组织学变化。（4）肝组织α1(Ⅰ)型前胶原mRNA表达的检测：组织总RNA的提取按RNAex Reagent说明书进行。α1(Ⅰ)型前胶原的上游引物为5′-CCTGGACGCC ATCAAGGTCTAC-3′，下游引物为5′-CCAAGTTC CGGTGTGACTCG-3′，扩增片段为419bp。内参照为β-肌动蛋白，上游引物为5′-ACCACAGCTGAGAGGGAAA TCG-3′,下游引物为5′-AGAGGTCTTTACGGATGT CAACG-3′，扩增片段为277bp。反应先将1μg的总RNA逆转录为cDNA，再以cDNA为模板扩增：95℃预变性5min后，35个循环：95℃变性45s，56℃退火45s, 72℃延伸1min，终末延伸1循环：72℃ 7min。取反应产物10μl在20g/L琼脂糖凝胶上电泳30min（80V），图像分析仪采集图像，以内参β-肌动蛋白为标准作半定量分析。……2Z$d#CD0Q
{] jm Q)M
作者单位：430030 武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院感染科
页:
[1]